Sådan bruges Sanger Reagenser

er Sangers reagens, der anvendes til at bestemme rækkefølgen af aminosyrer , der udgør et peptid. Reagenset vil hægte sig på - eller tag - aminosyren ved slutningen af ​​en peptidkæde , også kendt som N-terminus. Peptidet kan derefter opdeles i stykker ( hydrolyseret ), og de enkelte aminosyrer, undersøgt ved hjælp af forskellige kromatografiske metoder. Uanset hvilken aminosyre bærer tag er den ene i slutningen. Sangers reagens er også kendt som dinitrofluorbenzen ( DNFB ) . Når det er låst på en aminosyre , er det nævnt som en DNP- compound.Things du har brug
Laboratory skala
Handsker
Beskyttelsesbriller
Centrifuge
Centrifugerør hoteltilbud Pasteur pipetter
Destilleret vand
4,2% opløsning af natriumhydrogencarbonat
Sangers Reagent ( FDNB )
pH papir
Diethylether
6M opløsning af saltsyre
Acetone
Test rør myHotelVideo.com: Vis Flere Instruktioner
1

afvejes 3 milligram af peptid på en skala . Placer den i et centrifugeglas . Tilsæt ca 0,3 ml vand , 0,3 ml af Sangers reagens og 0,075 ml natriumbicarbonat.
2

Tillad centrifugerøret at inkubere ved stuetemperatur i en time. Under inkubationen rystes røret forsigtigt for at forhindre, at blandingen fra adskillelse . Kontroller pH af opløsningen hver 15 minutter med pH-papir . PH skal holdes over 9 . Hvis det begynder at falde , skal du tilføje en lille mængde af natriumbicarbonat (ca. en dråbe med Pasteur-pipette ) .
3

Efter inkubationen tilsættes 1,5 ml vand, og en lige mængde ether . Lad opløsningen adskilles i lag. Du kan have til at centrifugere blandingen for at separere den. Fjern etherlaget (den øverste , gule lag ) med en pipette og kassér den.
4

pH justeres ned til 1,0 ved langsom tilsætning af saltsyre. Tilføj en lille smule syre ad gangen, rør forsigtigt , så tjek pH med pH- papir . Alt i alt må det kræve omkring 0,15 ml syre. Hvis pH går under 1,0 , tilsættes en lille mængde (ikke mere end en dråbe ) natriumbicarbonat .
5

Tilsæt 3 ml ether . Lad blandingen adskilles. Nu det øverste lag ( det gule, etherlaget ) indeholder dit DNP -compound . Ved hjælp af en pipette forsigtigt udtrække dette lag og overføre det til en ren reagensglas . Placer reagensglasset til side og lade væsken fordampe , efterlader et tørt , gult faststof.
6

Vask dit stof med acetone. Tilføj 0,3 mililiters acetone , omrøres forsigtigt og udtrække væske med en pipette. Læg 0.75 mililiters syre til reagensglasset . Din peptid er nu mærkes og klar til at blive hydrolyseret og analyseres med det kromatografi metode efter eget valg.
Hoteltilbud