Sådan Forbered en hængende dråbe

at bestemme 3D- strukturen af ​​et protein , skal du først en ren krystal af det. Ophængningen slip-metoden anvender en dråbe af protein -holdige opløsning hængende fra et dækglas . Derunder hængende dråbe ligger et reservoir med en højere saltkoncentration end dråben. Over tid , vanddamp forlader slip og ender i reservoiret , der forårsager , at proteinet krystalliserer . Hvert protein kræver forskellige betingelser ( såsom salt koncentration og pH ) og ofte trial and error er den eneste måde at finde de rigtige conditions.Things du har brug
laboratoriekittel, handsker og øjenbeskyttelse
Mikropipette med pipette tips
1 molær opløsning af natriumchlorid i 0,05 molær , pH 4,7
2 ml Eppendorf-rør (eller lignende)
Centrifuge clipart plade med 24 brønde
Vakuum fedt i sprøjten
silikoniseret dækglas KAYAK Trykluft
Pincet
Clay (f.eks modellervoks eller lignende)
50 mg /ml lysozym i 0,05 molær acetatbufferopløsning , pH 4,7
Vis Flere Instruktioner

1

Tag lab gear ( frakke, handsker og øjenbeskyttelse ) .
2

Brug en mikropipette at tilføje 1,1 ml af en natriumklorid ( salt) og acetatbufferopløsning ind et Eppendorf-rør .
3

Centrifuger lukkede Eppendorf-rør med saltopløsningen inde i det i cirka fem minutter ved 13.000 rpm. Husk at balancere centrifugen ved at placere en anden Eppendorf-rør indeholdende 1,1 ml vand på tværs fra og modsat saltopløsningen røret.
4

Tilsæt 1 ml af saltopløsning til en brønd i en 24-brønds plade.
5

Brug en fedt - fyldt sprøjte til at placere et tyndt lag af fedt omkring kanten af ​​denne brønd . Pas på ikke at tilføje for lidt eller for meget. Hvis du tilføjer for meget fedt , vil fedtet løber ned i brønden og muligvis ødelægge dit eksperiment . Hvis du bruger for lidt , vil vel ikke være lufttæt og dit eksperiment vil ikke fungere. Målet for lige nok fedt at dækglasset og fedt danner en lufttæt forsegling senere.
6

Rul leret med dine hænder til at lave fire små kugler , og sæt dem på de fire hjørner af 24- brønde. De vil fungere som støtter for at sikre dækning af pladen ikke kommer i kontakt med dækglas .
7

Brug trykluft til at blæse støv væk fra dækglasset . Hold dækglasset med et par rene pincet .
8

Suck op 4 mikroliter af lysozymopløsning med din mikropipette og tilføje denne løsning til midten af ​​dækglasset . Skift pipettespidser , og tilsæt 4 mikroliter af saltopløsningen . Forsigtigt pipetteres op og ned, suger væske derefter udstøde det , at blande saltopløsningen med lysozymopløsningen . Vær omhyggelig med at blande de to uden at sprede væsken over hele dækglasset .
9

Drej dækglasset løbet hurtigt, så væsken ikke glider , og plante det helt og holdent på toppen af ​​godt . Vær omhyggelig med at trykke forsigtigt på det, så det danner en lufttæt forsegling med fedtet rundt i kanten af ​​brønden.
10

Skub afdækningen af 24- brønds plade onto ler bolde , og lad pladen på et køligt sted .
hoteltilbud